Анализ на бруцеллез в инвитро

Brucella spp. (род Бруцелла) — бактерии, являющиеся возбудителями бруцеллёза. Бруцеллёз — опасное инфекционное заболевание, характеризующееся длительным течением, тяжелыми поражениями костно-суставного аппарата, сердечно-сосудистой и нервной систем.

Бактерии рода Brucella устойчивы к воздействию внешней среды и долгое время в ней сохраняются. Основным источником и природным резервуаром инфекции являются козы, овцы, свиньи и крупный рогатый скот. В организм человека бруцеллы могут проникать через через поврежденную кожу и слизистые оболочки дыхательного и пищеварительного тракта. Человек может заразиться бруцеллёзом при употреблении полученного от больных животных сырого молока и молочных продуктов, приготовленных из него (сыра, масла, творога), от недостаточно прожаренного и проваренного мяса.

Инкубационный период заболевания длится от недели до нескольких месяцев, обычно 1–3 нед. Болезнь, как правило, развивается постепенно и специфических симптомов не имеет. Тем не менее, обычно больные предъявляют четыре основные жалобы: на перемежающуюся боль в суставах, иногда достаточно сильную; длительное повышение температуры тела до субфебрильных цифр; повышенную потливость и резкую слабость. Развиваются воспалительные изменения в различных органах. Бруцеллёз может протекать остро, подостро, субклинически (бессимптомно) или при неправильно проведенном лечении перетйти в хроническую форму (редко).

Данный анализ позволяет определить наличие ДНК бактерий рода Brucella в крови.

Метод ПЦР – полимеразная цепная реакция, позволяющая идентифицировать наличие в биологическом материале искомый участок генетического материала.
Подробнее о методе ПЦР — его разновидностях, преимуществах и области применения в медицинской диагностике.

Референсные значения — норма
(Brucella spp. (бруцеллёз), ДНК (ПЦР), качественный, кровь)

Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!

Определить это заболевание является непростой задачей. Очень часто людям, у которых вяло протекают симптомы, врачи могут спутать бруцеллез с раком, лейкозом, различными инфекциями. Очень важной ролью относятся эпидемиологический анамнез и клиническая картина.

Когда человек сталкивается с домашним рогатым скотом, то возникает большой процент заболевания.

Основываясь на симптомах нельзя с точностью подтвердить правдивость диагноза. Для того чтобы наверняка удостовериться в своем диагнозе используются аллергологический, бактериологический и серологический анализы. Также очень актуальным является проведение стандартных анализов, на бруцеллез, используя кровь, мочу, пункцию лимфатических узлов, суставной жидкости.

Бактериальное исследование имеет значительную отрицательную сторону – очень медленный рост бруцелл на питательных средах. Колонии вызревают лишь через 20 – 30 дней, что осложняет и замедляет постановление бруцеллеза. Такой анализ делать очень долго поэтому, сейчас очень актуально использовать серологические методы.

Для того чтобы убедиться, что у вас бруцеллез необходимо провести следующие анализы. Очень важную информацию дает именно кровь на бруцеллез. Ее можно сдать практически в любых медицинских учреждениях.

Сначала делают стандартный набор исследований:

  • Общий анализ крови. В ней нужно определить содержание лейкоцитов. Если показатель повышен, то это означает, что в организме присутствует воспалительный процесс. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) ускоряется, но не намного. Запущенная стадия заболевания приводит к понижению показателей всех элементов крови.
  • Общий анализ мочи. Здесь необходимо определить присутствует ли белок в моче, и в каких количествах. Для этого необходимо повторять такой анализ мочи несколько раз.
  • Биохимический анализ крови. Тут смотрятся уровни печеночного цитолиза (АлАТ, АсАТ), если эти показатели становятся выше нормы, то это говорить о гипербилирубинемии, снижается уровень альбуминов (гипоальбуминемия) при этом общий белок остается на нормальном уровне.

Чтобы определить возбудителя заболевания делают такие методы:

Он дает практически 100% достоверный результат.

Однако этот метод отличается тяжестью и длительностью. В качестве биологического материала используются кровь, моча, спинномозговая, внутрисуставная жидкость, желчь, а также проба из лимфатических узлов. Эти жидкости засевают на питательные среды и ждут роста микроорганизмов. Длительность этого метода составляет примерно чуть меньше месяца, а порой и целый месяц, все зависит от роста колониальных бруцелл.

Это самый популярный анализ для определения бруцеллеза. Результаты можно узнать уже после недели болезни. Этот принцип заключается в нахождении иммуноглобулинов (антител) в сыворотке к бруцеллезным антигенам. По их классу можно определить продолжительность и быстроту процесса. Для определения используют реакции Райта и Хеддельсона.

Бруцеллы убивают при помощи нагревания, и эта взвесь реагирует с сывороткой крови пациента. Если в процессе реакции бруцеллы склеиваются в маленькие шарики и осаждаются – это означает, что в сыворотке содержатся антитела и, значит, человек действительно болеет бруцеллезом. При отрицательной реакции заболевание не диагностируется. Этот метод хорош тем, что уже на ранних стадиях заболевания он может дать положительный результат. При помощи такой реакции находят бруцеллез не только у человека, но еще и животных.

Она не дает такого достоверного результата. Здесь агглютинация делается на стекле. Часто эта реакция дает ложный результат, поэтому ее применяют для обнаружения тех детей, которые должны обследоваться на бруцеллез.

Реакция Кумбса либо антиглобулиновый тест:

Его проводит для обнаружения антител, которые атакуют эритроциты.

Для обнаружения бруцеллеза используется прямая реакция. Эта реакция различает антитела, которые напрямую связаны с эритроцитами. Если антиглобулиновый тест показывает отрицательный результат – значит кровь чистая, и антител нет. Положительный результат означает появление антител, которые активно борятся с эритроцитами.

ПЦР-диагностика основывается, на обнаружении ДНК-цепей бруцелл из биологического материла пациента. Для этого материал обеззараживают, прибавляя метиолят натрия концентрацией 0,01% с дальнейшим прогреванием в течение получаса. Когда завершится инкубирование в лизирующем растворе, который содержит, все необходимые реагенты для экстракции ДНК при поддерживании температуры в 66С на протяжении 10-15 минут биологическая ткань обезвреживается.

Этот анализ обладает положительной чертой в том плане, что можно использовать абсолютно любую биологическую ткань пациента.

К одним из популярных методов относится реакция Брюне. Она основана на введении внутрикожно бруцеллин. Если есть бруцеллез, то на месте укола начинается покраснение и небольшая пастозность. Именно этот участок и оценивается как аллергологическая проба Бюрне. Пятно измеряют и делают заключение: если пятно превышает 6 сантиметров, то реакция считается положительной. Такая проба действительна, когда бруцеллез находится в хронической форме. Также необходимо учитывать еще и тот факт, что положительная реакция может возникнуть у людей, которые проходили вакцинирование по профилактике бруцеллеза.

45-20-408. Ат к Brucella (РПГА, суммарные — возбудитель бруцеллёза)

Биоматериал: Сыворотка крови

Срок выполнения (в лаборатории): 3 р.д. *

Бруцеллез — инфекционное заболевание, склонное к хроническому течению, характеризуется поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, половой и других систем. Относится к группе зоонозов. Возбудитель бруцеллеза — бруцеллы — мелкие неподвижные грамотрицательные бактерии. При постановке диагноза бруцеллеза полученные клинико-эпидемиологические данные должны быть подтверждены лабораторно. С этой целью используются бактериологический и серологический методы исследования. При остром бруцеллезе положительный результат исследования гемокультуры получают в 10-30% случаев (в 62-90%, если возбудитель B. melitensis и в 5-15%, если B. abortus). Культура СМЖ бывает положительной у 45% пациентов с менингитом. При посевах крови, костного мозга, мочи рост чистой культуры бруцелл можно получить через 5-10 суток, а в ряде случаев через 20-30 суток. В связи с этим для диагностики бруцеллеза широкое распространение получили серологические методы.

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Взятие крови проводится натощак или не ранее, чем через 4 часа после необильного приема пищи. Допустимо пить чистую не минеральную и не газированную воду. Чай, кофе, сок запрещаются.

Интерпретация результатов/Информация для специалистов

Результат исследования – качественный.

Референсные значения: не обнаружено

Для определения антител к возбудителю бруцеллеза в сыворотке крови используется РПГА, посредством которой определяют уровень антител, реагирующих главным образом с липополисахаридными антигенами бруцелл. У большинства больных титры специфических антител в крови повышаются на 3-5-й день от начала заболевания.

При однократном исследовании диагностически значимым титром является 1:160 и выше. Если в первом анализе титр ниже, то необходимо через 7-12 дней взять повторную пробу. Увеличение титров антител в четыре и более раз в пробах сыворотки крови, полученных с интервалом 1-4 недели, позволяет идентифицировать этиологический фактор заболевания. Повышенный титр антител выявляется у 97 % больных в первые 3 недели заболевания. Наиболее высокий титр антител наблюдают обычно через 1-2 месяца от начала заболевания, в дальнейшем он начинает быстро снижаться.

РПГА выявляет антитела к B. abortus, B. suis, B. melitensis, но не к B. canis. Повышенный титр антител может сохраняться у 5-7 % пациентов в течение 2-х лет после перенесенной инфекции. Поэтому метод РПГА не может быть использован для дифференциальной диагностики бруцеллеза с другими инфекционными заболеваниями, при наличии в анамнезе бруцеллеза в течение 2-х последних лет.

Причиной ложноположительных результатов могут служить проведение кожной пробы на бруцеллез, вакцинация против холеры, а также инфекции, вызванные холерным вибрионом, иерсиниями, Francisella tularensis. В ряде случаев могут отмечаться ложноотрицательные результаты РПГА у больных бруцеллезом, что объясняется эффектом прозоны или так называемым блокированием антител. При хронических локализованных формах бруцеллеза титры могут быть отрицательными или ниже 1:160. На фоне проводимого лечения титры антител быстро снижаются и в течение года приближаются к нулю. При рецидивах уровень антител снова повышается. Наличие однократного повышения титра антител > 1:160 является надежным объективным указанием на текущую или имевшую недавно место инфекцию. После лечения и выписки больного из стационара рекомендуется проведение серологических исследований в течение первого года через 1, 2, 3, 6, 9, 12 месяцев, а в течение второго года – ежеквартально.

Если при первом исследовании уровень антител ниже или антитела не определяются необходимо исследовать парные сыворотки. При исследовании в парных сыворотках для подтверждения диагноза необходимо исследовать кровь с интервалом в 10-14 дней.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *